Alex si singa adalah raja hutan kota, atraksi utama di Kebun Binatang Central Park, New York. Ia dan sahabat-sahabatnya—Marty si zebra, Melman si jerapah, dan Gloria si kuda nil—telah menghabiskan seluruh hidup mereka dalam kurungan yang menyenangkan di hadapan publik yang mengagumi dan dengan makanan yang disediakan secara teratur bagi mereka. Tidak puas untuk membiarkannya begitu saja, Marty membiarkan rasa ingin tahunya menguasainya dan melarikan diri—dengan bantuan beberapa penguin yang luar biasa—untuk menjelajahi dunia.

Waktu terus berubah bagi Manny si mamut yang pemarah, Sid si kungkang yang suka bicara kasar, dan Diego si harimau bertaring tajam yang cerdik. Kehidupan memanas bagi para pahlawan kita saat mereka bertemu dengan tetangga baru yang tidak terlalu ramah – dinosaurus perkasa.

Setelah digigit laba-laba radioaktif, seorang remaja Brooklyn, Miles Morales, mendapat pelajaran singkat cara berayun dengan jaring dari rekan-rekannya di dimensi lain.